哪些因素会影响微滴式数字PCR仪的控制性能？

　　微滴式数字PCR仪是一种核酸检测和定量分析的新方法，可以作为传统实时定量PCR的替代方法，以实现一致定量及稀有等位基因的检测。数字PCR的工作原理在于将DNA或cDNA样品分割为许多单独、平行的PCR反应，部分这些反应包含了靶标分子（阳性），而其他不包含（阴性）。单个分子可以被扩增一百万倍或更多。在扩增期间，TaqMan化学试剂及染料标记探针可用于检测特定序列的靶标。当不存在任何靶标序列时，没有信号累积。PCR分析后，阴性反应片段用于生成样品中靶标分子的一致计数，而无需标准品或内标。

 

　　功能/主要应用：                                                                 

　　1、微滴式数字PCR仪采用一种全新的方式进行核酸分子的定量，与传统PCR、定量PCR相比，其结果的精确度、准确性和灵敏度更加。其定量的结果不再依赖于Cq值而直接给出靶序列的起始拷贝数浓度，实现真正意义上的绝对定量。

　　2、主要应用于疾病相关分子标记物检测，稀有突变序列检测，病原微生物检测，食品安全及转基因成分检测，拷贝数变异遗传分析，基因表达分析等。

 

　　影响微滴式数字PCR仪的控制因素：

　　1、微滴式数字PCR仪之间的差别对实验结果的影响。没有任何两台PCR仪器的温度控制是一模一样的。相对于预设的温度模块温度总是偏高或偏低，就是同一模块不同的孔之间，温度有时也会不一样，相差可能达几摄氏度之多。一些PCR仪温度控制性能的不足造成的后果是：当PCR仪的模块温度在升温时，温度过冲或不足，不能准确的达到预设的平台温度。

　　2、温度控制技术的差别对实验结果的影响。导致PCR仪温度控制性能优劣的因素，首先是温度控制技术。调节PCR仪模块的温度，使其达到并保持在某一温度有很多方式。每一种方式都有优点和缺点。另外，这些技术被运用控制的水平对于温度控制的水准是很重要的，且有很大不同。大多数微滴式数字PCR仪的温度控制性能是很差的。在单一或多传感器控制机制上的不同显而易见的引起了温度的不均一性。

　　3、仪器老化对实验结果的影响。虽然PCR仪没有任何的机械或可移动部件，但是那并不意味着它不会磨损。电子器件的性能会随着时间的延长而老化，并由于过度的使用而加速老化。Peltier器件的失效或磨损会引起模块的热斑或冷斑，通常PCR仪器不能识别这种由于机械磨损，模块延展和收缩效应引起的温控性能的不同。因此，为掌握这些情况，实时监测PCR仪的温度控制性能是重要的。出于同样的原因，PCR仪温控性能的失常通常是实验失败或毁坏循环反应的重要原因。