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快看看你是不是用这个方法操作DNA提取试剂盒的

点击次数:201 发布时间:2022-04-18
  DNA提取试剂盒是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
 
  样本处理及要求:
  1、组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
  2、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
  3、不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
 
  DNA提取试剂盒的操作步骤:
  1、标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL
  2、加样:分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  3、加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
  4、温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
  5、配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
  6、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  7、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  8、终止:每孔加终止液50μl,终止反应。
  9、测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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