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数字PCR快速定量移植受体中的供体DNA

点击次数:460 发布时间:2021-09-28

背景:来自移植受者循环中移植物的无细胞DNA(cfDNA)是排斥反应的潜在生物标志物。通过使用微阵列和供体和受体DNA的大规模平行测序,在维持阶段的心脏移植后研究了其有用性。这些方法的缺点是成本高,周转时间长,需要供体DNA。因此,我们寻求使用数字微滴PCR(ddPCR)开发快速且经济有效的方法。

方法:从肝(LTx,n=10)、肾(KTx,n=9)和心脏(HTx,n=8)移植后的稳定受者和7例LTx后直接入院的患者采集血浆。已知的单核苷酸多态性具有较高的等位基因频率,共建立了41种水解探针分析方法。血浆cfDNA预扩增,然后用传统的实时荧光PCR方法确定信息(异源)SNP,然后用ddPCR对嫁接衍生cfDNA(GcfDNA)进行定量(百分比)。

结果:平均回收率为94%(SD,13%),不精密度为4%~14%。缓解组GcfDNA分别为<6.8%(LTx)、2.5%(KTx)和3.4%(HTx)。在LTx当天,GcfDNA大约为90%,到第10天,无并发症LTX接受者的GcfDNA为<15%。在2例经活检证实的排斥反应患者中,GcfDNA升高到60%,而在1例胆汁淤积症患者中未发现GcfDNA升高。

结论:开发了一种新的、经济有效的、快速的技术来定量移植受者的GcfDNA。这项技术体现了一种有希望的、潜在的通用生物标记物,用于早期检测排斥反应,这可能使更有效的治疗干预成为可能。


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